什么是多肽的纯度? 多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长),紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不。可发现其他的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加帽过程中产生的序列)脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或最后的裂解过程)。 多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA,如:游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。 在多肽中还存在哪些其他物质(杂质)? 纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐,大多数为序列被修改的多肽。 缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列 为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作,截断序列即产生于加帽过程中 产生于整个合成过程或最后的裂解过程 保护基重新附着在多肽的其他位置 纯度分析 多肽的纯度分析,一般都采用HPLC进行分析,选择RP-C18,粒径5μm,孔径300A,4.6×150mm,流动相:A,0.1% TFA/H2O;B,0.1% TFA/ACN,洗脱梯度,5%B--65%B,时间30min。也有些多肽,特别是短肽,由于亲水性强,在C18上保留很弱,需要改变条件,这里主要有两种方法:一个改变分析梯度,可以将起始梯度改为2%,等度或小梯度洗脱;另外一个方法是在流动相中加入强离子对试剂,如,十八烷基磺酸等。 多肽是如何纯化的? 多肽纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的多肽,有时还需要加入少量的Formic Acid或。HPLC分析多肽粗产物,如果多肽不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的多肽 肽的纯度能达到多少?我的实验需要多少纯度? 国肽生物可以提供不同的纯度级别供客户选择,从粗品到>98%纯度。根据客户需要我们可以提供纯度>98%的**纯多肽。各种纯度及应用范围如下:>70%,用于*实验和不敏感的筛选实验>80%,用于*实验和不敏感的筛选实验>90%,用于SAR研究和生物检测>95%,用于NMR,晶体结构研究及生物检测>98%,用于NMR,晶体结构研究及敏感的生物检测 合成纯度:Crude,脱盐,70%, 75%, 80%,85%, 90%, 95%,98%,99% 多肽产物纯度选择 常见的质谱级多肽纯度,一般要求>95% 用于抗体筛选纯度,一般>85%即可 NMR和结晶试验中,纯度一般>98% 粗品肽,一般>50%即可用于多肽筛选 多肽合成服务种类 多肽合成服务通常有线性肽合成服务、多种难肽合成服务、修饰肽合成服务、以及部分多肽合成公司还会提供多肽定制服务,定制出有针对性的合成肽。 目前有多肽合成公司提供的线性肽合成可达150个氨基酸,在修饰肽合成上,能提供常见修饰,化(Ser/Thr/Tyr),环化(酰胺环/二键环),荧光标记(5(6)-FAM,FITC,CY5,RhodamineB,PNA,EDNAS/dabcyl等),生物素标记(Biotin,Lys(Biotin))/复合抗原(MAP)/含D型氨基酸,及各种氨基酸衍生物均可合成。 国肽生物按照客户定制要求供应高品质普通多肽。 我们拥有成熟的多肽合成纯化方法,利用SPPS方法和液相合成方法为客户提供高品质多肽。我们的服务特点是: 1. 纯度:我们提供粗品肽和纯度纯度为70%,75%,80%,85%,90%,95%,98%,99%的纯品多肽。 2.脱盐和转盐:根据客户要求,我们可以对多肽进行脱TFA盐处理,也可以转为盐。 3.交货期限:30个氨基酸之内,一般2-3周,较快1-2周。 4.质量控制:每条多肽都免费提供合格的HPLC,MS和COA文件。 5.售后服务:1-2周内可以提出异议,我们免费复测,不合格免费退货,1-3个月内使用不合格可以免费提供复测,样品免费保存3个月。 国肽生物主要提供:多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、肽、生物素标记肽、荧光标记肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目录肽、偶联蛋白(KLH、BSA、OVA等)、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。详情请咨询国肽生物